【琼脂糖凝胶电泳是干什么的】琼脂糖凝胶电泳是一种常见的分子生物学实验技术，主要用于分离和分析DNA、RNA等核酸分子。该技术通过在琼脂糖凝胶基质中施加电场，使带电的核酸分子在凝胶中迁移，从而根据大小、形状和电荷的不同实现分离。它广泛应用于基因克隆、PCR产物检测、DNA指纹分析、质粒鉴定等多个领域。
一、琼脂糖凝胶电泳的基本原理
琼脂糖是从海藻中提取的一种多糖，具有良好的生物相容性和稳定性。将其溶解后冷却形成凝胶，作为电泳的介质。在电场作用下，带负电的核酸（如DNA）会向正极移动。由于不同大小的核酸在凝胶中的迁移速度不同，最终形成不同的条带，便于观察和分析。
二、琼脂糖凝胶电泳的主要用途
| 用途 | 说明 |
| DNA片段大小分析 | 可以判断DNA片段的大小，用于验证PCR产物或限制性酶切结果 |
| 质粒DNA纯度检测 | 通过电泳图谱判断质粒是否完整、是否被降解 |
| RNA完整性评估 | 在RNA电泳中，可观察28S和18S rRNA的比值，判断RNA是否降解 |
| DNA定量 | 结合标准品，可以粗略估算样品中DNA的含量 |
| 基因组DNA分析 | 用于分析基因组DNA的完整性及是否存在污染 |
三、琼脂糖凝胶电泳的操作流程
1. 制备凝胶：将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中，加热后倒入模具中冷却成凝胶。
2. 点样：将待测样品与上样缓冲液混合后，加入凝胶孔中。
3. 电泳：接通电源，施加电压进行电泳，通常时间为30分钟至1小时。
4. 染色与观察：使用溴化乙锭（EB）或安全染料对凝胶进行染色，紫外灯下观察条带。
四、琼脂糖凝胶电泳的优缺点
| 优点 | 缺点 |
| 操作简单，成本低 | 分辨率较低，无法区分非常接近的片段 |
| 适用于大多数核酸分析 | 对大分子量DNA分辨率较差 |
| 易于观察和记录 | 需要使用有毒试剂（如EB），需注意安全防护 |
五、注意事项
- 实验前应确保电泳仪和电源正常工作；
- 上样时避免气泡产生，以免影响迁移；
- 染色后需及时拍照或记录，避免长时间暴露在紫外线下；
- 使用EB时应佩戴手套，防止接触皮肤。
总结
琼脂糖凝胶电泳是一种基础而重要的分子生物学技术，广泛应用于科研和教学中。其核心功能在于对核酸分子进行分离与定性分析，帮助研究者判断样本的完整性、纯度以及大小信息。尽管存在一定的局限性，但其简便、经济、高效的特点使其在实验室中依然占据重要地位。
